如何降低实验室污染和假阳性？

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如何降低实验室污染和假阳性？

发布时间：2021-08-29 浏览次数：2376次

实验室质量管理的关键要素通常离不开人、机、料、法、环，保证实验室质量，减少实验室污染也离不开这几个要素。

1. 加强人员培训，养成良好的实验习惯，建立有效的沟通和激励制度

实验室质量管理最核心的要素是人，必须培养良好的实验操作和卫生习惯；

荧光定量PCR实验室分试剂配制区、样本处理区、核酸扩增区，严格分区管理；

不同区域的移液器用不同的标识区分，防止混用；

不同区域使用不同颜色的实验服区分，防止混穿；

不同区域的耗材、垃圾桶、锐器盒、抹布、拖把不混用；

实验完成后使用84消毒液擦拭地面、台面及移液器等；

实验完成后使用紫外消毒车0.5m左右照射台面30min；

严禁在实验室打开扩增后的荧光定量PCR管，严禁在实验室区域对扩增后的荧光定量PCR产物进行高压灭菌或者加热处理。

2. 选择性能良好的核酸提取仪和荧光定量PCR仪

大型的全自动化核酸提取仪设计时会引入分区设计、紫外防污染、层流防污染等措施，在选购核酸自动提取仪时应该考虑仪器的防污染性能。可以通过阴阳性样本交叉摆放，同时提取最大检测量的样本，来评估核酸提取仪的防污染性能。

关于荧光定量PCR仪的选择，某些仪器热盖设计存在严重缺陷，扩增结束后液体挥发严重，大量扩增产物泄漏，这种荧光定量PCR仪极易导致气溶胶污染。

3．选择带UNG酶防污染体系和内参的荧光定量PCR试剂盒

科学的试剂盒会引入UNG酶防污染体系，同时通过产品设计，保证PCR扩增效率。在降低气溶胶污染同时，保证检测的敏感性。

在荧光定量PCR扩增原料中不加TTP，只加UTP，扩增产物是含有UTP的核酸片段。UNG酶可以水解含有UTP的核酸片段，在扩增程序前添加UNG酶反应程序，可水解反应体系中含UTP的扩增产物，然后使用95℃高温灭活UNG酶，再运行荧光定量PCR反应程序，可以大幅度降低扩增产物气溶胶污染。

某些试剂盒附带的阳性对照浓度非常高（Ct值

使用带内参的荧光定量PCR试剂盒监控每个反应是否正常；使用弱阳性的样本（27

4. 荧光定量PCR应和普通PCR进行分区管理

某些检测中心针对相同的传染病检测，可能既开展荧光定量PCR检测，又开展普通PCR检测。如果普通PCR的扩增片段覆盖荧光定量PCR反应的扩增片段，则普通PCR的扩增产物极易污染荧光定量PCR检测系统。

5. 规范设计，改善PCR实验室环境

标准PCR实验室通常分为四个区（荧光定量PCR实验室无需产物分析区，分三个区），不同区域执行不同的实验操作（表1），中间品通过双扉传递窗单向传递。不同区域之间空气互相不流通，使用空调净化系统控制不同区域气压，形成压差，控制空气流向。每个区域设置缓冲间，缓冲间外部设置PCR实验室专用走廊（图1）。

表1 PCR实验室不同区域划分及功能特点

图1 PCR实验室平面布局示意图

注：四个独立工作区，从试剂配制区到产物分析区空气压力逐步降低；试剂配制区和样本处理区是正压室，外开门设计，保证外面的空气不进入；核酸扩增区和产物分析区是负压室，内开门设计，防止里面的空气溢出。

目前很多集团公司中心实验室装修设计越来越规范，但是区域实验室和临床实验室大多条件相对简陋，很难达到标准实验室要求。建议基层实验室在布局时，尽可能分三个房间设置不同功能区，如果做不到空气净化和压差控制，则每个房间应安装排气扇，及时通风。

专家点评

点评专家：王长年

非洲猪瘟背景下，猪场的生物安全风险(包括猪场人员流动、物品流动和猪只流动等)的监测评估、精准清除、引种(包括引入种猪和/或引入公猪精液等)都离不开实验室的检测，尤其是PCR实验室的检测。精准检测也逐渐成为各养猪企业的核心竞争力之一。

PCR实验室在检测非洲猪瘟病毒核酸的过程中常见一些假阳性结果，而这些错误的信息又会给猪场相关管理人员带来极大的心理和工作压力。本文作者就非洲猪瘟PCR检测过程中经常出现的假阳性结果的主因(如样本的采集、运输、保存和处理、阳性对照、试剂盒生产厂家、与之配套的仪器设备等)进行分析，对如何减少和避免假阳性结果发生(如人员培训、仪器配套、内参设置等)以及在实验室建设方面进行科学、合理、规范化的设计(如分区设置、通风处理)等多方面内容进行介绍，非常适合广大基层PCR实验室作为参考。

编辑：河北方田冯亚敏审阅：仇华吉

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